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更多关于液相色谱法的介绍
点击次数:850 发布时间:2014-01-16 返回

色谱法的分离原理是:溶于流动相( phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。



液相色谱法的特点和优点
HPLC有以下特点:
高压——压力可达150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速——流速为0.1~10.0 ml/min。
——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:
速度快——通常分析一个样品在15~30 min,有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到zui佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng,荧光和电化学检测器可达0.1pg。
柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少,容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。

 

液相色谱法对流动相的基本要求是:

①与固定相不互溶,不发生化学反应。

②对样品有适宜的溶解度,要求k值在1~10范围内(可用范围)或2~5(zui佳范围)。溶解度太大,k值太小,不利于分离;溶解度太小,k值太大,可能使样品在流动相中产生沉淀。

③必须与检测器相适应。例如用紫外检测器,流动相本身在检测波长处应无吸收。

④流动相的粘度要小,可以降低色谱柱的阻力而提高柱效。

⑤纯度高,不含机械杂质。

在HPLC中影响因素很多,流动相只是其中一个很重要的部分,要运用好液相色谱法还需考虑其他各个方面的因素。

 

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